你知道核酸凝膠染料有哪些特點(diǎn)么?下面就讓我們一起來(lái)了解一下吧。
1、無(wú)毒性:*的油性和大分子量特點(diǎn)使其不能穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),艾姆斯氏試驗(yàn)結(jié)果也表明,該染料的誘變性遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于EB。
2、靈敏度高:適用于各種大小片段的電泳染色,對(duì)核酸遷移的影響小于SYBRGreenI。
3、穩(wěn)定性高:適用于使用微波或其它加熱方法制備瓊脂糖凝膠;室溫下在酸或堿緩沖液中極其穩(wěn)定,耐光性強(qiáng)。
4、信噪比高:樣品熒光信號(hào)強(qiáng),背景信號(hào)低。
5、操作簡(jiǎn)單:與EB一樣,在預(yù)制膠和電泳過(guò)程中染料不降解;而電泳后染色過(guò)程也只需30分鐘且無(wú)需脫色或沖洗,即可直接用紫外凝膠透射儀觀察。
6、與EB有相同的光譜特性,無(wú)需改變?yōu)V光片及觀察裝置:標(biāo)準(zhǔn)的EB濾光片或SYBR濾光片都適用,使用與觀察EB相同的普通紫外凝膠透射儀觀察即可,在300nm紫外光附近可得到*激發(fā)。
但是不能被488nm氬離子激光器或相似波長(zhǎng)的可見(jiàn)光*激發(fā),因此不推薦使用此類(lèi)激發(fā)裝置的成像系統(tǒng)。對(duì)于此類(lèi)裝置,我們推薦您使用DuGreen(Cat#011或012),它和SYBRGreenI的光譜相似,靈敏度相當(dāng),但更加穩(wěn)定。
核酸凝膠染料注意事項(xiàng):
1、此方法染色染料用量相對(duì)較少。500μL染料大約可以做100塊50mL的膠。
2、由于具有良好的熱穩(wěn)定性,可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷卻。搖晃,振蕩或者翻轉(zhuǎn)以保證染料充分混勻。
也可以選擇將儲(chǔ)液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中,然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。兼容所有常用的電泳緩沖溶液。
3、如果總是看到條帶彌散或分離不理想,建議使用泡染法染色以確認(rèn)問(wèn)題是否與染料有關(guān)。如果染色后問(wèn)題依舊存在,則說(shuō)明問(wèn)題與染料無(wú)關(guān),請(qǐng)嘗試:降低瓊脂糖濃度;選用更長(zhǎng)的凝膠;延長(zhǎng)凝膠時(shí)間以保證邊緣清晰;改進(jìn)上樣技巧或選擇泡染法染色。
4、此方法不適合預(yù)制聚丙烯酰胺凝膠,對(duì)于聚丙烯酰胺凝膠請(qǐng)使用泡染法。
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